Light and electron immunohistochemical assays on paramyxean parasites

Tests immuno-histochimiques sur les paramyxines parasites en microscopie optique et en microscopie électronique

¹ Department of Parasitology, University of Queensland, Australia, 4072
² Centre for Microscopy and Microanalysis, University of Queensland, Brisbane, 4072 Australia
³ IFREMER-URPIGM, BP 133, 17390 La Tremblade, France
⁴ Instituto de Investigaciones Marinas - CSIC, Eduardo Cabello 6, 36208 Vigo Spain

Received: 5 March 1993
Accepted: 1 June 1993

Abstract

An indirect fluorescent antibody test (IFAT) incorporating a polyclonal antibody to Marteilia sydneyi recognized spornlating stages of M. sydneyi from Saccostrea commercialis but not those of Marteilia refringens, M. maurini, Marteilia sp. and Marteilioides branchialis from Ostrea edulis, Mytilus galloprovincialis, Mytilus edulis and Saccostrea commercialis respectively. This indicates that the antibody had a high specificity and that the other parasites were immunologically distinct from M. sydneyi. Immunoelectron microscopy was used to investigate background labelling and the specificity of the antibody to antigenic sites. It showed that though most immunoglobulins were specific to parasite epitopes, some reacted to host tissue. IFAT's based on three monoclonal antibodies raised against Marteilia sp. did not recognise spores or other stages of M. sydneyi. An immunogold-silver staining technique using the polyclonal antibody to M. sydneyi failed to identify the presumed presporulation stage of M. sydneyi in the connective tissue of a recently infected host. This suggests the antigens were stage-specific. Thus a DNA probe rather than immunohistochemical tests may be more useful in investigating the life cycle of this parasite.

Résumé

Dans un test en immunofluorescence indirecte, des anticorps polyclonaux spécifiques de Marteilia sydneyi ont réagi positivement contre les formes sporulées de ce parasite associé à l'huître Saccostrea commercialis. Par contre, aucune réaction n'a été observée avec les formes sporulées de Marteilia refringens, M. maurini, Marteilia sp. et Marteilioides branchialis qui sont respectivement associées à Ostrea edulis, Mytilus galloprovincialis, Mytilus edulis et Saccostrea commercialis. Ces résultats ont montré que les anticorps polyclonaux sont hautement spécifiques et que les autres parasites sont immunologiquement différents de M. sydneyi. La réactivité des anticorps a été étudiée en microscopie électronique, ce qui a révélé que la majorité des immunoglobulines sont spécifiques d'épitopes parasitaires, certaines réagissant avec les tissus de l'hôte. Par ailleurs, trois anticorps monoclonaux spécifiques de Marteilia sp., parasite de Mytilus edulis se sont révélés négatifs en immunofluorescence indirecte vis-à-vis des spores et des autres stades de M. sydneyi. Selon la technique d'immunogold, les anticorps polyclonaux spécifiques de M. sydneyi n'ont pas permis d'identifier le stade présporal présumé de ce parasite dans le tissu conjonctif d'un hôte récemment infecté. Ceci suggère que ces anticorps sont spécifiques de certains stades. Ainsi, un test utilisant une sonde ADN pourrait être mieux adapté que des tests immunologiques pour étudier le cycle de développement de ce parasite.